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        生物玻片制作技巧

        來源:http://www.cx6db.cn/    日期:2023-03-14    瀏覽量:載入中...

        新購買的生物玻片是不能直接使用的,需要先將玻片浸泡于95%的酒精中,這樣可去除表面附著的物質。用之前取出晾曬活烘干備用。


        玻片的清潔將直接影響到制片質量,所以制作玻片標本的第一步是要對載玻片和蓋玻片進行清潔處理。

        使用過的舊玻片,先用肥皂水或洗衣粉水煮沸0.5h,冷卻后用軟毛刷刷掉臟物,用流水沖洗干凈后,置于95%酒精中備用。如果是石蠟切片可先放于二甲苯(可用制片時回收的廢棄二甲苯,既避免污染環境又節省實驗成本)中浸泡數小時,把封片用的樹膠溶解掉,將蓋玻片和載玻片分開后,再用肥皂水煮沸。對于很臟的舊玻片可先用洗液浸泡24h(洗液配制:取重鉻酸鉀50g,加水300ml,加熱攪拌溶解,待其冷卻后,徐徐注入濃硫酸250ml,邊加邊攪拌即成,可長期使用),取出用自來水沖洗干凈后,置于95%酒精中備用。


        涂片的制作


        取材要快速,避免發生細胞自溶現象;操作要輕巧,防止損傷細胞結構。


        涂片要均勻,厚薄要適度,太厚細胞堆疊,太薄細胞過少,都會影響觀察。操作時,以在載玻片上涂上淡淡的一層樣品為宜。如果樣品細胞密度過大,如過濃可用生理鹽水稀釋后再做涂片。


        制作血涂片時,須用雙蒸水,否則易引起染料沉淀;Giemsa染液對酸堿度極敏感,當染液偏酸時,紅細胞染成紅色,偏堿時則染成藍色,所以用pH6.8―7.0的緩沖液來配制染液。

        人體組織玻片.jpg

        裝片的制作


        在觀察動物組織細胞的臨時裝片時,為保持細胞的正常形態,應根據動物種類的不同使用相應的生理鹽水。如哺乳類等溫血動物用0.9%生理鹽水,兩棲類等冷血動物用0.65―0.7%生理鹽水,無脊椎動物用0.45%生理鹽水,海產無脊椎動物可用過濾海水。

        染色可使觀察更清楚,除了碘液(碘0.5g、碘化鉀1g、水150ml)以外,還可用1%美藍或甲基綠(0.5%甲基綠100ml,醋酸1ml)染色。

        制作半永久裝片,可用甘油封片。將固定、染色過的標本放入5%甘油中,用紗布封口,放在陰涼處2―3天,使水分蒸發、甘油變濃后,吸一滴帶有標本的甘油于載玻片上,蓋上蓋玻片。對于怕壓、易碎的標本,可在甘油的兩邊放兩根細玻璃絲,再加蓋玻片。

        制作永久裝片,一般用樹膠封片。封片前,要先將固定、染色過的標本經各級酒精及兩次純酒精脫水、每級15min,然后用酒精二甲苯等混液、兩次純二甲苯透明各15min。處理小型的浮游生物,在換液時可離心,使其沉淀,便于操作。


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